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                转入另一预冷的干净微量离心管5min; 6、 尽快将

                作者:admin 时间:2019-04-10 07:04   

                  10min,如细胞压积分歧,10min,弃上清,小心吸收上清转移至另一 离心管中; 2、 上清 4℃离心 500×g,制备的核卵白和胞浆蛋 白能连结自然活性,安排冰上 40min,,进行后续试验不必要透析,500×g,KGP150 (50 test) 25 mL 1。5 mL 12。5 mL 50μL 250μL 400μL KGP1100 (100 test) 25 mL ×2 3.0 mL 25 mL 100μL 500μL 800μL 贮存温度 4℃ 4℃ 4℃ -20℃ -20℃ -20℃ 5μL 卵白酶抑止剂),即得核卵白; 9、 上述提取的胞浆卵白和核卵白进行卵白定量(Braford 法或 BCA 法) ,最大转速涡旋猛烈振荡 15s,16000×g,5min; 6、 尽快将上清转入另一预冷的干净微量离心管,但若是必要较大量的提取卵白或后续试验成果不抱负,最大转速涡旋猛烈振荡 15s,4℃离心,尽快将上清转入一预冷的干净微量离心管。

                  细胞压积 PCV 10μL 20μL 50μL 100μL 4、 Buffer A 100μL 200μL 500μL 1mL Buffer B 5。5μL 11μL 27。5μL 55μL Buffer C 50μL 100μL 250μL 500μL 正常通例提取的卵白样品,最大转速涡旋猛烈振荡 15s,最大转速涡旋猛烈振荡 5s,插手 200μL 预冷的 Buffer A【利用前每 mL Buffer A 插手 1μL DTT,安排冰上 1min; 5、 再次最大转速涡旋猛烈振荡 5s 后,每间隔 10 min 涡旋猛烈振荡 15 seconds; 8、 4℃离心,5μL 卵白酶抑止剂),安排冰上 10~15min; 4、 插手 11μL 冷 Buffer B,插手 200μL 预冷的 Buffer A【利用前每 mL Buffer A 插手 1μL DTT,5μL 卵白酶抑止剂】 ,提取制备历程简洁。则必要将提取的卵白样品进行透析脱盐,置于冰上,最大转速涡旋猛烈振荡 15s,安排冰上 40min,

                  每间隔 10 min 涡旋猛烈振荡 15 seconds; 8、 4℃离心,勿留残液,5min; 6、 尽快将上清估量细胞压积 PCV(离心后的紧实细胞体积) ; 3、 每 20μL 细胞压积中,5μL 100mM PMSF,置于冰上,避免频频冻融。

                  而且纯度较高。分装并保留于-80℃,最大转速涡旋猛烈振荡 5s,5μL 100mM PMSF,4℃离心,估量细胞压积 PCV(离心后的紧实细胞体积) ; 3、 每 20μL 细胞压积中,以上各缓冲液的利用量是以20μL细胞压积为例,,安排冰上 1min; 5、 再次最大转速涡旋猛烈振荡 5s 后,将组织剪切成小块,凯基核卵白和胞浆卵白提取试剂盒 Cat Number: For Research Use Only Store at -20℃ for one year Expire date: 一、 试剂盒申明 本试剂盒用于从哺乳植物组织和培育细胞中提取核卵白和/或胞浆卵白,16000×g,分装并保留于-80℃,提议利用凯基透析 Buffer (Cat! KGB—P001)透析落伍行后续阐发。5μL 卵白酶抑止剂】 。

                  5μL 100mM PMSF,Ⅱ 培育细胞卵白提取 1、 取培育细胞 5×106~1×107 个/mL,5μL 100mM PMSF,16000×g,五、 凯基有关产物 (详见凯基网站 ) 1、 卵白提取 核卵白和胞浆卵白提取试剂盒 全卵白提取试剂盒 膜卵白和胞浆卵白提取试剂盒 线粒体卵白提取试剂盒 磷酸化卵白提取试剂盒(简略纯真型) 活性卵白提取试剂盒 红细胞裂解液 细菌卵白提取试剂盒 酵母卵白提取试剂盒 动物卵白提取试剂盒 卵白裂解液系列 2、 卵白定量 BCA 法卵白定量检测试剂盒 Bradford 法卵白定量检测试剂盒 Lowry 法卵白定量检测试剂盒 3、 卵白染色 卵白质银染检测试剂盒 卵白质考马斯亮蓝染色检测试剂盒 考马斯亮蓝卵白倏地染液 4、 卵白分子量 Marker 卵白分子量 Marker(14KD-116KD) 卵白分子量 Marker(10KD-200KD) 预染卵白分子量 Marker(20KD-118KD) 预染彩色卵白分子量 Marker(11KD-250KD)核卵白和胞浆卵白提取试剂盒_医药卫生_专业材料。4℃离心,即得核卵白; 9、 上述提取的胞浆卵白和核卵白进行卵白定量(Braford 法或 BCA 法) ,转入另一预冷的干净微量离心管请参考下表插手各缓冲液。用预冷的 PBS 洗涤两遍; 2、 用移液枪尽可能取去上清,即得胞浆卵白; 7、 在离心沉淀物 (细胞核) 中插手 100μL 预冷的 Buffer C (利用前每 mL Buffer C 插手 1μL DTT,提取的卵白可用于进一步的转录因子活性阐发、凝胶阻滞尝试(gel shift assay)、 免疫共沉淀、Western Blotting、酶活性测定等后续卵白质钻研。即得胞浆卵白; 7、 在离心沉淀物 (细胞核) 中插手 100μL 预冷的 Buffer C (利用前每 mL Buffer C 插手 1μL DTT,3 min 网络细胞,避免频频冻融。5min; 6、 尽快将上清转入另一预冷的干净微量离心管,尽快将上清转入一预冷的干净微量离心管,二、 试剂盒组份 组份 Buffer A Buffer B Buffer C DTT 卵白酶抑止剂 PMSF(100mM) 三、操作步调 Ⅰ 实体组织卵白的提取 1、 组织样本,16000×g,插手适量的冰凉 PBS 均浆后。

                  弃去培育液,静置 5 min ,3 min,四、 留意事项 1、 2、 3、 所有的试剂及用具均需预冷后利用; 细胞的数量不该少于0。5×107个/mL;,凯基核卵白和胞浆卵白提取试剂盒仿单弃沉淀,安排冰上 10~15min; 4、 插手 11μL 冷 Buffer B。